ELISA試劑盒為什么要嚴(yán)格按照說明書操作?
ELISA試劑盒為什么要嚴(yán)格按照說明書操作?
市面上銷售的ELISA試劑盒種類繁多,不同指標(biāo)的檢測(cè)范圍及實(shí)驗(yàn)方法不盡相同,甚至相同指標(biāo)不同廠家的試劑盒實(shí)驗(yàn)方法都可能會(huì)不一樣。但基本原理都是一致的,是將可溶性的抗原或抗體吸附到聚苯乙烯等固相載體上,進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量方法。
每一個(gè)試劑盒里都會(huì)有對(duì)應(yīng)的說明書,注意事項(xiàng)里大多都會(huì)提到“實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行”。為什么要嚴(yán)格按照說明書操作?為了完整的回答這個(gè)問題,需要先回顧一下ELISA各種方法的原理。
根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀及檢測(cè)的具體條件,可設(shè)計(jì)出不同類型的檢測(cè)方法。大致分為以下幾類:
1.雙抗體夾心法測(cè)抗原;2.雙抗原夾心法測(cè)抗體;3.競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原;4.間接法測(cè)抗體回顧完原理。
下面總結(jié)如果不按說明書操作可能會(huì)出現(xiàn)的不滿意結(jié)果。
1.先說嚴(yán)重的操作錯(cuò)誤,看錯(cuò)或壓根不看試劑盒配套說明書,不按操作步驟加樣。比如把競(jìng)爭(zhēng)法的試劑盒當(dāng)作雙抗體夾心法來(lái)做,導(dǎo)致的結(jié)果就是整板顯示很強(qiáng)的藍(lán)色,無(wú)任何梯度。
2.混用別的試劑盒里的試劑。不同廠家或者相同廠家的不同試劑盒,所含的試劑成分很可能是不一樣的,混用導(dǎo)致的結(jié)果是,浪費(fèi)珍貴的樣本,樣品的回收率達(dá)不到預(yù)期值,如果混用不同試劑盒的酶復(fù)合物,會(huì)導(dǎo)致顯色過弱或過強(qiáng),因?yàn)槊糠N試劑盒所用酶復(fù)合物效價(jià)可能不一樣。
3.不看文獻(xiàn)或者不做預(yù)實(shí)驗(yàn)。比如某個(gè)試劑盒按照其靈敏度范圍和文獻(xiàn)報(bào)道推算樣本應(yīng)該1:10稀釋,結(jié)果稀釋成1:1000,導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過弱,結(jié)果不可用。
4.不校準(zhǔn)移液器及培養(yǎng)箱的溫度濕度。導(dǎo)致工作試劑濃度不準(zhǔn)確,孵育溫度不合適,實(shí)驗(yàn)帶來(lái)誤差。
5.洗滌不充分,每孔洗液加樣過少,或者殘留。導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過快,同時(shí)背景較高。
6.手洗板時(shí)所用槍頭沒有懸空加入洗液,導(dǎo)致洗液污染,整個(gè)實(shí)驗(yàn)失敗。
7.剩余酶標(biāo)板條未及時(shí)放入干燥袋,導(dǎo)致酶標(biāo)板受潮,下一次再做時(shí),顯色過弱或污染,CV值過高。
8.試劑盒保存條件不當(dāng)。試劑盒要求放4℃的,放在了-20℃?;蛘咭蠓?20℃的,放在了4℃。均會(huì)導(dǎo)致試劑盒敏感性下降。
以上只是常見的操作錯(cuò)誤。順利完成一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要注意的細(xì)節(jié)很多,許多操作環(huán)節(jié)都影響到檢測(cè)的質(zhì)量。
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